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      Efecto de la preservación hipotérmica de hepatocitos aislados de rata en la solución de la Universidad de Wisconsin (UW) sobre la destoxificación de amonio.

      Sebastián D. Calligaris(1),  Luciana L. Almada(1),  Graciela  Furno(2),  Edgardo E.       Guibert(3),  Joaquín V. Rodríguez(4).

      (1)Farmacología, Fac. Cs. Bioquim. y Farm. UNR (2)Estadística, Fac. Cs. Bioquim. y

      Farm. UNR (3)Biología Molecular, Fac. Cs. Bioquim. y Farm. UNR (4)Farmacología

      Fac. Cs. Bioquim. y Farm. UNR

      mailto:caliga@ciudad.com.ar

La preservación hipotérmica (PH) puede modificar las funciones metabólicas del hepatocito y en consecuencia, comprometer su perfomance en el hígado bioartificial y/o transplante hepatocelular.

Utilizando hepatocitos aislados de rata (HC) se estudió el metabolismo del amonio (NH4+) durante la PH y posterior reoxigenación. Los HC fueron preservados (0 ºC, 72 hs) en UW (grupo I) y en UW+Adenosina (Ad) 2.5 mM (grupo II). Luego los HC recién aislados y los preservados (HP) se reoxigenaron (37 ºC, 2 hs) en Krebs-Henseleit adicionado con una sobrecarga de NH4Cl 0.2 mM. Las determinaciones de NH4+ se realizaron con un método cinético-enzimático. La viabilidad celular se estableció con el % de liberación de lactato deshidrogenasa (LDH). Los resultados mostraron que al cabo de 72 hs de PH, la [NH4+]extracel. se incrementó en presencia de Ad (I: 0.23±0.02 mM; II: 0.54±0.09 mM; n=5; p<0.05). La [NH4+]intracel. y la LDH fueron similares en ambos casos (I: 0.9±0.2 mM; 1.8±0.2 %; II: 1.1±0.2 mM; 2.4±0.5 %; n=5).

En la reoxigenación, la eficiencia de eliminación de la sobrecarga de NH4+, EDA= {[NH4+]toh - [NH4+]2h)/[NH4+]oh}x 100, de los HP fue semejante a la determinada en HC controles (47.9±13.0 % HC vs 40.2±5.1 % HP; n=3) a pesar de la diferencia en LDH (9.9±2.8 % HC vs 17.7±4.5 % HP; n=3; p<0.05; 2 hs). Conclusiones: a) la PH no afecta la capacidad de los hepatocitos de destoxificar NH4+, b) durante la PH en II se produce NH4+ probablemente debido a la desaminación hidrolítica de la Ad.

 

La incorporación de ATP a la Solución de la Universidad de Wisconsin (UW) mejora la viabilidad funcional de hepatocitos sometidos a preservación       hipotérmica/reoxigenación

      María E. Mamprin(1),  Angel  Scandizzi(1),  Graciela  Furno(2),  Joaquín V. Rodríguez(1).

      (1)Farmacología, Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. UNR.

      (2)Estadística. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. UNR.

      mmamprin@fbioyf.unr.edu.ar

En este trabajo se analizaron diferentes estrategias destinadas a corregir la depleción de ATP que se produce durante la preservación de hepatocitos aislados de rata (HC), fenómeno que afecta la viabilidad funcional de los mismos en la reoxigenación.

Para ello se adicionó a la sol. UW el precursor Adenosina (Ad) o ATP. Los HC fueron preservados (72 hs, 0ºC, N2) en: 1) sol. UW sin agregados, 2) sol UW+Ad 5mM, 3)UW+ Ad 10mM, 4)UW+ ATP 5 mM, 5)UW+ ATP 10mM y 6)UW+ ATP 15mM. Se determinó durante la preservación el contenido celular de ATP (nmol/106cél) y la liberación de láctico deshidrogenasa (LDH, %).

A las 72 hs de preservación los HC del grupo 5 mostraron un mayor contenido de ATP:  24.81 ± 2.61 vs el grupo 3: 11.95 ±1.48  (n=4,  Anova *p<0.05).

Finalizado el período de isquemia fría, los HC fueron reoxigenados (120 min, 37ºC, carbógeno, Krebs-Henseleit) y se determinó el contenido celular de ATP, la liberación de LDH y la sintesís de GSH. El grupo 4 mostró a los 120 min. una mejor conservación de ATP: 14.82 ± 1.74 vs el grupo 3: 8.84 ± 1.12  n=3.

La liberación de LDH y la sintesís de GSH mostraron un comportamiento similar. Se concluye que la incorporación de 10 mM ATP a la solución UW resulta más efectivo que Ad para evitar la pérdida de nucleotidos que se produce durante la preservación hipotérmica.

Efecto que se correlaciona con una mejor capacidad de los HC para sintetizar GSH durante la reoxigenación.

 

 

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