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La sobrevida celular vía RalA en fibroblastos

 

 

 

 

      NIH3T3

      Alejandro P. Adam(1),  Julio  Aguirre Ghiso(1),  Lydia I. Puricelli(1),  Elisa D. Bal de Kier

       Joffé(1).

      (1)Area Investigación. Instituto de Oncología A. H. Roffo. Universidad de Buenos Aires.

      aleadam@fmed.uba.ar

El conocimiento de las vías de transducción que regulan la sobrevida celular es de suma

importancia para la generación de nuevas terapias oncológicas. Estudiamos si RalA, una GTPasa

de la familia Ras, es necesaria para la sobrevida en células NIH3T3 transformados con v-Ras,

v-Raf ó v-Src, mediante la co-expresión de una dominante negativa de RalA, S28N-RalA.

Observamos que estos oncogenes permitieron al 100% de éstas células sobrevivir en suspensión,

en tanto que la co-expresión de S28N-RalA elimina esta capacidad. El tratamiento de células

NIH3T3-Neo con cisplatino 0,1mM o privación de suero por 24h indujo apoptosis en el 80% de

las células, según tinción con naranja de acridina, mientras que la apoptosis en NIH3T3-v-Ras,

-v-Raf y -v-Src fue menor al 20% (p<0,05 vs Neo). En cambio, la co-expresión de S28N-RalA

indujo apoptosis superior al 50% en todos los casos (p<0,05 vs control). La inhibición de PI3K

(100nM wortmannina) sinergizó con S28N-RalA en NIH3T3-v-Ras, mientras que la inhibición de

MEK (50uM PD96059) sinergizó en NIH3T3-v-Raf en ensayos de privación de suero. En las

células NIH3T3-v-Raf, el ac. fosfatídico restituyó la capacidad de sobrevida. La expresión de

S28N-RalA no modificó el nivel de fosforilación de MEK o JNK, pero aumentó la fosforilación de

p38. Estos resultados sugieren que RalA es necesaria, junto a PI3K ó MEK, para la actividad

antiapoptótica de los oncogenes v-Ras, v-Raf y v-Src, posiblemente a través de la modulación de

la actividad de PLD1 y Rho.





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