Progesterona(PR) por Heregulina(HRG) y Proteínas Quinasas Activadas por Mitógenos(MAPK) en células de carcinoma mamario humanoT47D.

      Leticia  Labriola(1),  Mariana  Salatino(1),  Cecilia  Proietti(1),  Omar A. Coso(2),  Adalí

       Pecci(2),  Eduardo  Charreau(1),  Patricia  Elizalde(1).

      (1)Instituto de Biología y Medicina Experimental. (2)Facultad de Ciencias Exactas y

      Naturales.UBA

      mailto:labriola@dna.uba.ar

El tratamiento de células T47D con HRG indujo tanto la 'down-regulation' del PR como la

disminución de la cantidad de sitios de unión (control: 939± 298 fmol/mg proteína,

HRG:198±128.6fmol/mg proteína, Acetato de Medroxiprogesterona(MPA):203.2± 58.9fmol/mg

proteína). HRG produjo un aumento (p<0.01) del porcentaje de PR localizado en el núcleo

(control:23.6±11.4%, HRG:83.3 ±5.8%, MPA:88.8 ±3.1 %). Ensayos de 'DNA mobility shift'

demostraron que HRG induce la unión específica  del PR a un PRE y que ésta se ve inhibida por el

pretratamiento tanto con PD98059,inhibidor de MEK-1, como con oligodeoxinucleótidos

antisentido de ErbB-2 (ASODN ErbB-2). En transfecciones transientes de células T47D con un

vector conteniendo un PRE fusionado al gen de la cloranfenicol acetil transferasa(CAT) se observó

que HRG aumentó (p<0.01) la actividad de CAT. Esta activación transcripcional del PR fue

inhibida por el pretratamiento con ASODN ErbB-2, PD 98059 o RU486.(Control:26.6±2.9 %,

MPA:100%, HRG:79.2±3.2%, HRG+ASODN ErbB-2:33.9 ±3.1%, HRG+SODN ErbB-2:65.7

±3.7%, HRG+PD98059:25.2±4.5%, HRG+RU486:42.6±4.2 %). Ensayos de fosforilación in

vitro mostratron que MAPK aisladas de células tratadas con HRG, fueron capaces de fosforilar al

PR. MAPK inmunoprecipitadas de células que habían sido pretratadas con PD98059 inhibieron

este efecto. Estos resultados demuestran que HRG es capaz de transactivar al PR y proporcionan

la primera evidencia de que MAPK tienen la capacidad de fosforilarlo in vitro.