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Progesterona(PR) por Heregulina(HRG) y Proteínas Quinasas Activadas por Mitógenos(MAPK) en células de carcinoma mamario humanoT47D. |
Leticia Labriola(1), Mariana Salatino(1), Cecilia Proietti(1), Omar A. Coso(2), Adalí
Pecci(2), Eduardo Charreau(1), Patricia Elizalde(1).
(1)Instituto de Biología y Medicina Experimental. (2)Facultad de Ciencias Exactas y
Naturales.UBA
mailto:labriola@dna.uba.ar
El tratamiento de células T47D con HRG indujo tanto la 'down-regulation' del PR como la
disminución de la cantidad de sitios de unión (control: 939± 298 fmol/mg proteína,
HRG:198±128.6fmol/mg proteína, Acetato de Medroxiprogesterona(MPA):203.2± 58.9fmol/mg
proteína). HRG produjo un aumento (p<0.01) del porcentaje de PR localizado en el núcleo
(control:23.6±11.4%, HRG:83.3 ±5.8%, MPA:88.8 ±3.1 %). Ensayos de 'DNA mobility shift'
demostraron que HRG induce la unión específica del PR a un PRE y que ésta se ve inhibida por el
pretratamiento tanto con PD98059,inhibidor de MEK-1, como con oligodeoxinucleótidos
antisentido de ErbB-2 (ASODN ErbB-2). En transfecciones transientes de células T47D con un
vector conteniendo un PRE fusionado al gen de la cloranfenicol acetil transferasa(CAT) se observó
que HRG aumentó (p<0.01) la actividad de CAT. Esta activación transcripcional del PR fue
inhibida por el pretratamiento con ASODN ErbB-2, PD 98059 o RU486.(Control:26.6±2.9 %,
MPA:100%, HRG:79.2±3.2%, HRG+ASODN ErbB-2:33.9 ±3.1%, HRG+SODN ErbB-2:65.7
±3.7%, HRG+PD98059:25.2±4.5%, HRG+RU486:42.6±4.2 %). Ensayos de fosforilación in
vitro mostratron que MAPK aisladas de células tratadas con HRG, fueron capaces de fosforilar al
PR. MAPK inmunoprecipitadas de células que habían sido pretratadas con PD98059 inhibieron
este efecto. Estos resultados demuestran que HRG es capaz de transactivar al PR y proporcionan
la primera evidencia de que MAPK tienen la capacidad de fosforilarlo in vitro.